1、准备和仪器介绍需要准备的试剂和耗材：样品和纯化需要的缓冲液，收集管；上机之前所有的缓冲液必须经过0.22µm的滤膜过滤并超声脱气30min以上，样品高速离心后取上清液，待用。

2、登录电脑进入操作双击桌面上UNICORN 7.0图标，进入log on界面，用户名默认为Default，输入密码：default，进入系统。在进入系统时会弹出四个界面：system control界面为主操作窗口，所有的设置选项都在这个界面下完成的，点击进入；（administration界面为UNICORN 7.0系统设置界面；evaluation界面为结果数据查看及处理窗口；method界面为方法编辑界面。）

3、清洗泵和管道第一步需要清洗泵和管路，开始之前需要把滤头从20%乙醇中取出，放入去离子水中。具体操作：清洗泵点击manual –execute manual instructions—pumps—pump wash — inletA1/A2—insert—inletB1/B2—insert；设流速点击manual –execute manual instructions—pumps—system flow—设置流速1mL/min或2mL/min（将delta压力选上），insert； 设柱位点击manual –execute manual instructions—flow path—column position设置柱位（1/2/3/4/5任选一个），insert；设柱压点击manual –execute manual instructions—alarms—alarm delta column pressure设置high alarm，insert；alarm pre column pressure设置high alarm，insert（每个柱子的最大压力可以在tools column hanging中查到）；系统参数设置完，点击execute。4、平衡柱子待管路有液体流出时，安装柱子。用水冲洗5个柱体积之后点击pause键暂停，将滤头放入样品平衡液中，点击continue开始用平衡液冲洗5个柱体积之后点击pause键暂停开始上样。

5、上样将滤头放入样品中，点击continue开始上样（上样过程防止液体被吸空），样品上完后点击end键。

6、洗脱洗脱前先将滤头放在elution buffer中，然后操作步骤如下：设流速点击manual –execute manual instructions—pumps—system flow—设置流速 （将delta压力选上），insert； 设柱位点击manual –execute manual instructions—flow path—column position设置柱位，insert；点击manual –execute manual instructions—flow path—inject valve— inject，insert； 设紫外点击manual –execute manual instructions—monitors—auto zero UV，insert，wavelength（可选三个紫外波长），insert；设收集点击manual –execute manual instructions—fraction collection—设置体积或时间收集，insert；（收集管一定要提前放置好）设报警压点击manual –execute manual instructions—alarms—alarm delta column pressure设置high alarm，insert；alarm pre column pressure设置high alarm，insert；系统参数设置完，点击execute。

7、清洗泵及卸下层析柱（先下后上）待收集完成后，点击end键，将放入缓冲液的滤头放入去离子水中 设流速点击manual –execute manual instructions—pumps—system flow—设置流速1mL/min或2mL/min（将delta压力选上），insert；设柱位点击manual –execute manual instructions—flow path—column position设置柱位（1/2/3/4/5任选一个），insert；设柱压点击manual –execute manual instructions—alarms—alarm delta column pressure设置high alarm，insert；alarm pre column pressure设置high alarm，insert用水冲洗5个柱体积之后点击pause键暂停，将滤头放入20%的乙醇中，点击continue开始用20%的乙醇中冲洗5个柱体积之后点击end，柱子卸掉拧好。